二胡一般采用泛音进行调弦，当然也可以利用其它乐器进行调弦，选用乐器调弦时要注意二胡本身的发音特点。
二胡一般采用泛音进行调弦，具体方法是：左手小指按住弦长（指千金与琴马之间的线段）的1/2处，运弓拉响外空弦音后，然后将小指轻浮，这时会得出一种纯净透明、类似竹笛声的外空弦高八度音，它与浑厚圆润的外空弦音形成一种强烈的色彩对比，当弓子在外弦上拉满一弓后，现在弓毛又转为擦内弦，这时小指离弦，用食指轻浮于全弦的1/3处，随着弓子的渐渐推进，此时会发出一种细腻清越，比内空弦高十三度的琴声，其音量略小于外弦1/2处的八度泛音。如果内外弦的五度音是调准了的，这两处的泛音音高应完全相等；如果它们之间的音高还存在着偏差，这说明五度音的准确度还不够。如果不求绝对音高，只要求相对音高的话，我们可以以任意一根弦的泛音音高为“参照音”，然后把另一根弦指定位置的泛音音高调到相等高度为止。
初次练习泛音，内弦1/3处泛音效果很可能不如外弦1/2处理想，这也许是内弦推弓的力度不如拉弓容易控制，可改变方式试试。初次练泛音，会发出烦燥刺耳的“杀鸡杀鸭”声，这可能是三方面原因造成的：一是弓毛擦弦用力不匀，二是触弦位置（即泛音点）不对，三是指头触弦是采用的实按。努力从这三个方面去改进，就有可能发出透明清越的泛音来。
除了用泛音来校对二胡的定音外，也可用其它固定音高乐器来帮助二胡定音。像钢琴、口琴、笛子及音笛、音叉等都可以用来定音，但选用这些乐器来定音一定要从二胡这件乐器的发音性能来考虑，过高过低都会影响演奏效果。过高则由于琴弦的张力大，使琴皮承受的压强超过了规定限度，振动极不协调，就会导致发音干枯单调，还会大大缩短琴弦琴皮的使用寿命；定得过低由由于琴弦过于松弛，琴皮共振效果差，造成发音晦涩暗淡、同时因琴弦失去必要的张力，使指头触弦时缺乏相应的反作用力，音准也不易控制。